我刚进实验室，做分离，想问楼主，现在我用生物碱总碱进行分离纯化，请问能否用大孔树脂。

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我在上样后出现了气泡，这时候怎么办？是否可以拿玻璃棒搅动？而且我在清洗柱子的时候出现了断层现象（水冲，不存在密度不一致问题），原因是什么？

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本人使用大孔树脂进行实验有3年时间，树脂的预处理与再生方法应具体根据树脂的类型分别进行处理。
一、树脂的预处理
1、树脂装入交换柱后，用蒸留水反洗树脂层，展开率为50-70%，直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止，再用50%-100%乙醇10-15倍体积慢速淋洗。
2、用约2倍体积的4-5%HCl溶液，以2m/h流速通过树脂层。全部通入后，浸泡4-8小时，排去酸液，用洁净水冲洗至出水呈中性。冲洗流速为10-20m/h。
3、用约2倍树脂体积的2-5%NaOH溶液，按上面进HCl的方法通入和浸泡。排去碱液，用洁净水冲洗至出水呈中性。流速同上。
酸碱溶液若能重复进行2-3次，则效果更佳。
经预处理后的树脂，在第一次投入运行时应适当增加再生剂用量，以保证树脂获得充分的再生。

二、树脂再生方法

1、酸性树脂
用2.5倍树脂体积的HCl溶液（浓度4%）以2倍树脂体积60-80 min通完，然后用纯水的相同流速（慢速淋洗）30 min之后，加大流速（6BV/h）快速淋洗至出水PH至6-7为止。
2、碱性树脂
方法同上，再生剂为4%NaOH溶液，尘洗终点为出水PH7-8。
3、中性树脂
配制碱性盐水（含8%NaCl，2%NaOH），以用2.5倍树脂体积60-80 min通完，然后浸泡2-4小时，以纯水淋洗至出水PH呈中性。

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实验总结
1,大孔树脂的度量:个人认为大孔树脂中除含水以外，还含有脂溶性成分，所以用测定含水量的方法不是很方便。我在实验中采用测定树脂体积进行度量，经实验对比发现，此方法很适用。
2,吸附量的确定：可以采用过量的对照品进行吸附，根据两者相减可得理论吸附量。实际实验及生产中，特别是生产中，因样品中其他物质的影响，吸附量却大大低于理论吸附量。
在实验中，我一般采用过量样品代替对照品进行吸附量的测定，在实验中上样量仅为此测定吸附量的60-80%，这样可解决吸附过量的问题。
3,流速的控制:应根据树脂体积及高度核算。

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回答：
我在上样后出现了气泡，这时候怎么办？是否可以拿玻璃棒搅动？而且我在清洗柱子的时候出现了断层现象（水冲，不存在密度不一致问题），原因是什么？

1、上样出现气泡不能用玻璃棒搅动，如使用的是小柱子（直径≤1cm），可使用振动的方法解决（指用洗耳球等物敲击，不是指玻璃棒等硬物），如直径较大（≥3cm），就可不用管他。
2、洗柱子断层问题：注意观察，在用水冲的时候一般会有气泡产生（可能是水与洗脱剂进行交换时产生，我也不太认得），气泡在向上移动的时候集结，自然就产生断层；另一种原因自然是密度问题，你在用水洗的时候上面的部分（全水）与下面的部分（水与洗脱剂混合）之间密度一般不同，自然就分层。

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在树脂的洗脱过程中，洗脱下来的液体颜色是不是由深到浅啊，
我现在做提取的是蒽醌类物质，颜色由红黑 到黄在变红，不知正确吗？
在样前，药物只是用醇提或水提，在直接浓缩，离心上样；
上样后，只是用水快速冲洗，出去水溶性杂质和色素，能除尽色素吗？
好像不能把，那用大孔树脂提取出来的物质并不纯啊，
初次做大孔树脂，很多不懂之处，希望各位高手多多帮助，谢了啊。

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请问各位大虾：
大孔吸附树脂称量问题，上面有大虾提到烘干，具体怎么烘呢？
（多少度烘干恒重？各型号一个温度还是各自考虑？烘完后需要挑出不合格的吗？）；

也有大虾提到干，湿的一起考虑，湿的标准是怎样？有文献说抽滤至干，可以吗？

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哪位大侠能告诉我柱床体积怎么定义的吗?

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小弟发现的一篇文章与各位共享。
用大孔吸附树脂分离川芎总提物

1　大孔吸附树脂的预处理及再生
1.1　预处理：取市售大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗脱(或用改良索氏提取器加热洗脱)，洗至洗脱液蒸干后无残留物。经乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
1.2　装柱：以乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至与水混合不呈白色混浊为止(取1 mL乙醇液加5 mL水)。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇，备用。少量乙醇存在将会大大降低树脂的吸附力。
1.3　再生：将样品溶于少量水中加至柱的上端，也可以将样品先溶于少量乙醇中，拌入适量树脂，挥去乙醇后，再将拌有样品的树脂加到柱上。先用水，继而以乙醇-水洗脱，逐步加大醇的浓度，同时配合高效液相色谱法作指导。一般用95%的乙醇洗脱至无色时，树脂柱即已再生，然后以大量水洗去醇，即可进行下一次的提取分离。经反复使用后，吸附树脂颜色变深，吸附效果下降时，可用0.01%～1 mol/L NaOH(或HCl)洗涤或浸泡适当时间，至树脂接近原颜色为宜，继用蒸馏水洗至中性即可再用。如果柱上方沉积有悬浮物，影响流速，可用水从柱上进行反洗，以便把悬浮物顶出。经多次使用后，有时柱床挤压过紧，或树脂颗粒部分破碎而影响流速，可从柱中取出树脂，盛于一个较大容器中用水漂洗除去小颗粒和悬浮杂质，再重新装柱。大孔吸附树脂应湿态保存，若部分颗粒暴露在空气中失水，在进行水溶性杂质分离时，失水后被空气填充的颗粒会浮于水面，此时将上浮树脂用乙醇处理，将树脂内部的空气排出后使用。
2　川芎总提取物的分离
　　取川芎饮片，略破碎，用95%乙醇回流提取9次，每次1.5 h，溶媒用量为8～10倍，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至干，再加适量水加热使溶解，抽滤，滤液加到已处理好的大孔吸附树脂柱(干膏和树脂的比例为1∶15～20，或药材和树脂的比例为1∶2～3)上，慢慢滴加完后，先用水洗至还原糖反应呈阴性(Molish反应)，改用30%乙醇洗至阿魏酸和川芎嗪全部洗脱完全(Rp-HPLC法检测，检测液中无阿魏酸和川芎嗪的色谱峰)，合并30%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至干，低温真空干燥，呈淡黄色粉末，即为川芎总提取物(含川芎生物碱类和酚类化合物)，其中川芎嗪和阿魏酸二者约占本品的25%～29%，收率为0.6%。

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想问一下，什么样的组分可以用离子交换的介质分离。另外，树脂，纤维素，葡聚糖的介质用来分离有什么具体差别吗？

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hao_shihai wrote:
原创：：：：

我来谈谈大孔吸附树脂
１．关于预处理
其实每种树脂都会附带有前处理说明，这种前处理一般用于指导工业，目前还没有药用标准，所以也没有药用标准的预处理方法，在一般研究时，不考虑残留问题，主要是除掉树脂中影响吸附和检测的杂质，这些杂质包括交联剂，致孔剂等，通常使用的水－醇－酸－碱洗涤可以解决大多数实际问题．但有时也会出现不理想的情况，这是可以在水－醇－酸－碱洗涤前加一个丙酮回流（一般不小于８小时），这样就基本上没有其他问题了．同时需要指出的是：酸碱的浓度一般是５％（质量百分比）和１Ｍ（摩尔浓度），而乙醇多采用９５％乙醇，也有用无水乙醇和７５％乙醇的，我比较倾向于７５％乙醇，这样醇水交替洗涤时柱中产生气泡的可能性就小多了．当然－－－一家之言．

２．关于树脂工艺的研究思路
　
　　思虑才是应用的核心，初接触树脂的人大都没什么好思路，而做过植化的人会将层析的思路移花接木，当然如果用于于相似成分的分离，这种层析思路还是很好的，如果用于富集分离就有点勉强了．因为富集分离时不用考虑柱效，就没有考虑径高比之说．
　　２．１．树脂的筛选
多采用静态吸附法对一系列树脂进行快速筛选，筛选的目的是筛出吸附能力大的树脂，但是吸附能力大的树脂未必吸附速度快，未必洗脱容易，所以一般选出２～３中树脂进行进一步考察．（具体筛选方法以后在讨论）
　　２．２．树脂动态吸附＼洗脱考察
一般要控制好流速（１～２ＢＶ／ｍｉｎ）做泄漏曲线和洗脱曲线（具体方法可以与个别人讨论），确定洗脱溶媒，洗脱体积，上样处理量等参数．

３．关于一些问题的个人理解

．大孔树脂度量方法，尤其是实验室确定其吸附能力，对量的准确度要求很高，我见到过以下三种办法：测体积＼称潮重＼烘干称重，我个人比较倾向于烘干称重，原因：１，树脂耐热＼耐酸碱，２，称量准确．认为孔树脂完全烘干后吸附效果会受影响是不科学的，因为烘干只为称重，使用时不会是干态，而树脂出厂为何湿保存，是因为树脂干态时脆性大，易破碎从而引起吸附能力下降．（怎样烘？可和个别人讨论）
　
　　由于时间关系，就先谈到这吧！！！

我在用大孔跑丹参型号是HPD-100请问有什么注意的？谢谢！！

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小弟想请教一问题:
在测定大孔树脂对该药品的吸附量时,饱和吸附后,被水洗脱下来的物质的质量该怎么测啊?
我就用旋转蒸发,最后称出质量.但我发现对药品有一定的损失.
我看了好多说的都是
用密度×体积.但密度是怎么测呢?
我想过用HPLC,和分光光度计测,但好像不行!因为它的标准曲线不知道!
谢谢!希望前辈给予知道!

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请大家帮帮忙!啊!

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我遇见过，我把洗脱液超声脱气。效果还蛮好的。
注意：极性不要变化太大了哦！！！！！

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请问怎样进行色谱柱的径高比，收集洗脱液的量工艺优选？以什么作为考察指标？麻烦各位帮帮忙！！

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一般用95%乙醇冲洗，再用大量去离子水洗至无醇味，如果树脂重复次数过多，你可以先用1%氢氧化钠浸泡，冲洗，再用乙醇洗，水洗。

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请问各位，大孔树脂上样是像上硅胶柱那样，浓缩到浓度很浓上样，还是直接把提取液上到树脂柱上？？还有树脂柱装上候好像树脂流动性很大，稍微加的洗脱剂快些，树脂就会乱跑，我是在上面加了层棉花，请问大家有更好的办法吗？

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这个不错.

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对以前的精彩回帖进行了整理，详见附件，供大家参考。

大孔吸附树脂.doc (55.0k)

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啊，我有个很疑惑的问题.
我选用的是XAD-16大孔树脂,说是吸附非极性物质.可是当我用甲醇洗脱以后,把甲醇蒸干,发现里面有很多水溶性杂质!这是为什么呢!!!!而且想用甲醇再溶也溶解不了啦.

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hikarugo wrote:
啊，我有个很疑惑的问题.
我选用的是XAD-16大孔树脂,说是吸附非极性物质.可是当我用甲醇洗脱以后,把甲醇蒸干,发现里面有很多水溶性杂质!这是为什么呢!!!!而且想用甲醇再溶也溶解不了啦.

你的洗脱程序是什么?

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先用水冲洗，然后再用甲醇洗脱的。
所以最后浓缩甲醇发现还有很多水溶性物质，真的觉得很奇怪呢。而且那些东西大多都象是原来培养液（细菌发酵）中的色素，还呈现很粘稠的状态

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baobo wrote:
请教几个问题:
1,大孔树脂上样浓度是浓点好,还是稀点好?
2,流速为1ml/min是不是太慢了,影响实验进展,好像加快点对效果影响不大,谁有这方面的经验体会可以分主享?
3,水溶解时不溶物一般怎么处理,可能含有少量要的成分,我一般是洗一洗就算了,各位大虾有什么高招?

1.稀一点好，一来不容易形成死吸附；二来可以加快上样速度，从而延长树脂的寿命；
2.流速一般没有什么严格的定义，偶认为你可以根据你的柱子的大小，选择适当的流速，不过上样的时候一定要小流速，这样样品吸附效果较好；
3.你的问题好象是说水洗部分的溶解性不好，可以稀醇试试看，不过这与你的分离目的有关系了，不好决定～

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看文献遇到ZTC-1大孔树脂，但搜了半天发现ZTC-1为澄清剂中一种，应该先用ZTC-1先处理后再上柱子，但文献中并没有指出柱子的型号，到底文献中所提的ZTC-1大孔树脂该如何理解？希望各位大虾指点！！

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江边一碗水 wrote:
大孔吸附树脂在上样后是否需要静止一段时间，以求得吸附平衡，此问题大家能探讨一下吗？
我以为上样直接 让样品液通过柱子，那么被柱子吸附的只是其中一部分，我们在实验中发现，流出液中被测成分能占到综上样量的10%，因此，认为此方法值得讨论。不知道各位是怎么做的

改变流速和浓度，这种方法不值得提倡。因为有时即使在最佳流速和浓度，被分离成分依然被冲下来。这时，需反复上样2～4次，直到绝大多数被吸附。上样时需低流度。

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江边一碗水 wrote:
大孔吸附树脂在上样后是否需要静止一段时间，以求得吸附平衡，此问题大家能探讨一下吗？
我以为上样直接 让样品液通过柱子，那么被柱子吸附的只是其中一部分，我们在实验中发现，流出液中被测成分能占到综上样量的10%，因此，认为此方法值得讨论。不知道各位是怎么做的

我认为让样品直接流过主机就可以了，只要速度控制好就可以，可以采取先快后慢的方法，那样吸收应该比较完全

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学习了，谢谢

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实验室上的大孔树脂柱冲多长时间就能沉好？ (责任编辑：活性炭网) 织梦二维码生成器